Hemopoetske matične celice popkovnične krvi

Dobro za proliferativno potenciala in priložnosti repopulyatsionnym krvotvorni vir celic hematopoetskih matičnih celic deluje kot popkovnične krvi. Večkrat je bilo dokazano, da v času dostave krv popkovnične krvi vsebuje dovolj veliko število slabo razvitih hematopoetskih progenitornih celic. Nekateri avtorji menijo, da je prednost krvotvornih presaditve matičnih celic iz popkovnične krvi ni potrebe, da bi našli darovalca združljiv za HLA-antigeni. Menijo, da nezrelost imunskega sistema vzrokov novorojenčka zmanjšal funkcionalno aktivnost imunokompetentnih celic in s tem manjša kot pri presaditvi kostnega mozga, pojavnost hude reakcije "presadka proti gostitelju«. V tem presadka celičnega preživetja popkovnične krvi ni nižja od celic kostnega mozga, tudi v primeru uporabi manjše število GSK apliciran na 1 kg teže pacienta. Vendar pa je po našem mnenju optimalno število vprašanj presaditi popkovnične krvi celice, ki so potrebne za učinkovito prijetje presadka v telesu prejemnika, njihovo imunološke skladnosti in številnih drugih vidikih presajanja hematopoetičnih matičnih celic iz popkovnične krvi zahteva bolj resno analizo.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

Pridobivanje hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi

Postopek za pridobitev hemopoetičnih matičnih celic popkovnične krvi takoj zahteva njegovega vnosa po rojstvu in njegovo ločitvijo od placente, kadar je posteljica v maternici ali ex utero, kot tudi za carskim rezom, temveč tudi ex utero. Dokazano je, da se v primeru zmanjšanja časa od rojstva do ločitve novorojenega od posteljice do 30 sekund povečuje prostornina pršćne krvi v povprečju za 25-40 ml. Z poznejšim postopkom se izgubi enaka količina krvi. Ugotovljeno je, da zgodnja ločitev otroka od ožilja ne povzroča nobenih negativnih posledic za novorojenčka.

Ruščina Research Institute of Haematology in transfuzijsko razvil učinkovit in cenovno ugodno tehnologijo tako popkovnične krvi v fizioloških linije ((70,2 + 25,8) ml) in carskim rezom ((73,4 + 25,1) ml). Postopek za ločevanje popkovnične krvi z dovolj visokim dobitkom mononuklearnih celic in gručasta - (83,1 + 9,6) in (83,4 + 14,1)%, oz. Izboljšan postopek za kriogensko ohranjanje popkovnične krvi, ki zagotavlja visoko varnost mononuklearnih celic in CFU-GM - (96,8 + 5,7) in (89,6 + 22,6)%, v tem zaporedju. Učinkovitost metode za vzorčenje krvi drenaža popkovnične uporablja vsebnik "Kompoplast-300« (Rusija). Ograje kabel krvi avtorji izvedli takoj po rojstvu in njeno ločitev od posteljice, v smislu dajanja placento v maternici ali ex utero. Pred punkcijo od popkovna vene popkovine enkrat obdelamo s 5% tinkture joda, in nato dvakrat - 70% etanola. Kri teče skozi povezovalne cevi v posodo spontano. Trajanje postopek vzorčenja ne traja več kot 10 minut. 66 Zbrani drenaža metoda volumen vzorca popkovine krvi v povprečju (72 + 28) ml, in število levkocitov v vzorcu v povprečju celoti - (1,1 + 0,6) x x 107. Analiza popkovnične krvi na sterilnost (bakterijske okužbe, HIV-1 virus hepatitisa B in C, sifilis in okužba citomegalovirusa) samo v enem vzorcu smo identificirali IgG protiteles proti hepatitisu C. V drugi študiji enkrat placente, potem ko je površina ploda rojstva objavljen na posebnem okvirju navzdol, je vrvica obdelamo s 5% natrijevim jod in 75% etilo TH alkohol. Popkovine vene z iglo izteka iz sistema za transfuzijo (G16). Kri je tekla v vsebnik spontano. Obseg vzamemo kri način povprečje (55 + 25) ml. Papir G. Kogler s sodelavci (1996) popkovnične krvi, ki zaprt način in pridobljeni velike količine krvi - povprečno (79 + 26) ml. Avtorji ugotavljajo, da je med 574 kabel vzorce krvi vsebujejo približno 7% manj kot 40 ml krvi, ki ne dovoljujejo, da jih uporabljajo za presajanje. K. Isoyama s sodelavci (1996), pri čemer kri kabla z aktivnim exfusion pomočjo brizge, ki je v povprečju 69,1 ml krvi (volumen popkovnične krvi variira od 15 do 135 ml). Na koncu so A. Abdel-Mageed PI sodelavci (1997) z punovinnoy vensko kateterizacijo pridobljeni v povprečnem 94 ml popkovnične krvi (od 56 do 143 ml).

Da bi zmanjšali tveganje iatrogenega okužbe in kontaminacije s mater izločkov razvitih zaprto zbirka krvni sistem, ki temelji na široko uporablja transfuzioinoy sistema Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (ZDA), ki vsebuje 62,5 ml CPDA (citrat-fosfat-dekstroza z adeninom) kot antikoagulant. Tehnologija za pripravo materiala, je bistvenega pomena za pripravo kakovostnega vzorca glede na količino vsebine in čistost celične suspenzije a. Obstoječih metod zbiranja popkovnične krvi, kotoryeuslovno razvrščeni v zaprti, polodprtem in odprtem prednost sistema sleduetotdavat prvič, saj v zaprtem sistemu bistveno zmanjša tveganje kontaminacije z mikrobi materiala, kot tudi onesnaženje suspenzije celic matične celice.

A. Nagler in soavtorji (1998) so izvedli primerjalno analizo učinkovitosti vseh treh vzorčnih sistemov za popkovnično krvjo. V prvi varianti se je postopek izvajal v zaprtem sistemu z odvajanjem krvi neposredno v posodo. V drugi varianti je bila popkovna kri pridobljena z metodo aktivne krvne eksfuzije injekcijskih brizg 1 z nadaljnjim pranjem vene posteljice in istočasnim odvajanjem krvi v posodo (odprta metoda). V tretji varianti se je kri odvzela v pol odprtem sistemu, tako da ga aktivno izvlečemo z brizgami in pere skozi arterijo popkovine s hkratnim eksfuzijo v posodo. V prvi verziji so avtorji prejemali popkovnično kri v prostornini (76,4 + 32,1) ml z levkocitnim številom (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ na 1 ml krvi. V drugi varianti so bili ustrezni indeksi (174,4 + 42,8) ml in (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; v tretjem - (173,7 + 41,3) ml in (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Najpogostejša okužba vzorcev krvi popkovnice je bila ugotovljena pri uporabi odprtega sistema. Določena je neposredna povezava med maso placente in volumnom ekstrahirane krvi - z naraščajočo maso placentov se količina zbrane krvi povečuje.

Po vzorčenju krvi popkovnične krvi sledi ločevalni korak - izolacija mononuklearnih celic in čiščenje celične suspenzije iz eritrocitov. Pod eksperimentalnimi pogoji celic z jedri ločeni z njihovo sedimentacijo metilceluloze eritrocitov lizo z amonijevim kloridom. Vendar se za klinične namene metilceluloza ne sme uporabljati, ker izguba hematopoetskih matičnih celic doseže 50-90%. Lizo eritrocitov v povezavi z velikimi količinami delovne raztopine v kliniki tudi komaj opravljena, čeprav odstotek ločevanja na ta način celic z jedri z fenotip CD34 +, in matičnih celic CFU-GM funkcije in CFU-GEMM občutno višja. Poročali so o novem sredstvu za izolacijo mononuklearnih celic v gostotni raztopini kupitorjev gostote (BDS72). Ta snov ima naslednje fiziološke parametre: pH - 7,4, osmolalnost - 280 mosm / kg, gostota - 1,0720 g / ml. Po mnenju avtorjev je s svojo pomočjo mogoče izolirati do 100% CD34-pozitivnih celic in odstraniti 98% rdečih krvnih celic. Vendar klinika še ne uporablja BDS72.

Testirani celic z jedri iz popkovnične krvi metod ločevanja se običajno uporablja za 10% HES raztopino ali 3% raztopino želatino. Učinkovitost padavin eritrocitov in izoliranje celic z jedri v obeh primerih približno enaka. Vendar pa v primeru uporabe kot sredstva želatino usedlega mogoče dobiti nekoliko večje število CFU-GM, kot pri uporabi HES. Predpostavlja se, da je razlika v rekuperaciji CFU-GM neenako hitrostjo zaradi odlaganja posameznih frakcij ali gručasta celice sposobnost HES molekule absorbirajo na hematopoetičnih celičnih površinskih receptorjev in s tem blokirajo njihovo občutljivost na kolonije stimulirajoči faktorji, ki se uporabljajo pri kultiviranje CFU-GM in vitro. Kljub temu lahko tako sedimenter pa je primerna za izolacijo celic z jedri v ustvarjanju velikih popkovnične krvi bank.

Metode ločevanja in kriogene konzervacije popkovnične krvi se načeloma ne razlikujejo od tistih, ki se uporabljajo pri delu s hematopoetskimi izvornimi celicami periferne krvi in kostnega mozga odraslih darovalcev. Toda pri pripravi velikega števila vzorcev krvi popkovnice za svoje banke je treba načine ločitve najprej poceni. Zato sedaj žal na kliničnih potrebah že uporabljamo rutinske metode izolacije in kriopreservacije celic krvi popkovnične krvi in učinkovitejše, a finančno učinkovite metode ostajajo veliko eksperimentatorjev.

Na splošno so bila določena merila za ocenjevanje števila hematopoetskih celic in zahteve za preučevanje vzorcev krvi popkovnične krvi, da bi ugotovili nalezljive snovi. Da bi zagotovili presaditev celic krvnih celic popkovnice, je treba vse vzorce krvi pregledati predvsem za hematogene okužbe in genske bolezni. Nekateri avtorji priporočajo dodatne posebne metode študiji popkovnične krvi za diagnosticiranje dednih bolezni, kot so talasemijo in anemije srpastih celic, pomanjkanja adenozin deaminaze, agammaglobulinemia Bruton, bolezni Harlera in punter.

V skladu s priporočili Ticheli L. S sodelavci (1998), v vsakem vzorcu popkovnične krvi je potrebno določiti število celic z jedri, SB34-pozitivnih celicah in CFU-GM, nosijo HLA-tipkanje določiti krvno skupino ABO in Rh število njenih članov. Poleg tega se cepljenje izvedemo bakterioloških, seroloških testov za HIV in okužbe s CMV, HBsAg, hepatitisa C, HTLY-I in HTLV-II (T-celična levkemija, človeka), sifilis, toksoplazmoze. Polimerazna verižna reakcija na citomegalovirus in okužbo z virusom HIV je obvezna.

Sam postopek za pridobivanje popkovne krvi je treba izvajati v skladu z načeli medicinske bioetike. Pred začetkom zbiranja krvi je potrebno pridobiti soglasje nosečnice za njeno izvajanje. Predhodni intervju z nosečnico za pridobitev soglasja za izvedbo vseh manipulacij, od krvne eksfuzije do dokončanja dokumentacije, opravlja le medicinsko osebje. V vsakem primeru nedopustna, ki opravlja katero koli od teh postopkov osebje, biološke, kemijske, farmacevtske in druge nemedicinske izobraževanja, z vidika kršitve uveljavljenih norm bioetiki in človekovih pravic. Pri pozitivni reakciji na nosilni HBsAg, protitelesa za povzročitelja hepatitisa C, HIV in sifilis popkovnične krvi ne sprejme, in zbrane vzorce krvi že zavrgli in uniči. Treba je opozoriti, da je prevoz latentne okužbe pri novorojenčkih precej redkejše kot pri odraslih, zato je verjetnost hematogenim prenosa in razvoj infekcijskih zapletov obtočil infuzijami popkovnične krvi celic je bistveno nižji kot pri presaditvi kostnega mozga od odraslih darovalcev.

Pomembna točka uporabe popkovnične krvi pri kliničnih poskusih je ocena presadka, ki temelji na kvantifikacijo hematopoetskih matičnih celic v vzorcu popkovnične krvi celic in odmerkih, ki so potrebne za transplantacijo. Standardi za optimalno število celic krvi popkovnice, potrebne za presaditev, še niso razviti. Ni splošno sprejetega stališča tudi na takih rutinskih parametrih kot število CD34-pozitivnih celic in CFU-GM. Nekateri avtorji ocenili potencial hematopoetskih celic z analizo dolgoročnih kultur z določitvijo vsebnosti tvorijo kolonije enot skupna granulociti, eritrociti, monociti in megakariocitov - CFU-GEMM.

Vendar pa v kliničnih nastavitvah standardna ocena transplantacije popkovnične krvi ponavadi vključuje le določitev števila jedrnih ali mononuklearnih celic.

Shranjevanje hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi

Nekateri problemi obstajajo v tehnologiji shranjevanja celic hematopoetske popkovine. Ko kriogensko ohranjanje hematopoetskih matičnih celic, da bi dosegli njihovo optimalno načina zamrzovanja mora zmanjšati količino popkovnične krvi in rdečih krvnih celic prej odstranijo zaradi preprečevanja hemolizo in tveganje nezdružljivosti reakcijo eritrocitne antigene (ABO, Rh). Za te namene so primerne različne metode za izolacijo nukleiranih celic. V zgodnjih 90-ih prejšnjega stoletja najbolj razširjena metoda ločevanja celic z jedri v gradientu gostote na Ficoll z gostoto 1,077 g / ml, ali perkolacijo z gostoto 1.080 g / ml. Ločitev popkovnične krvi z gradientom gostote omogoča izbiro pretežno mononuklearnih celicah, vendar vodi do znatne izgube hematopoietičnih matičnih celic - do 30-50%.

Učinkovitost sedimentacije hidroksietilnega škroba v procesu izolacije celic popkovnične krvi je ocenjena na različne načine. Nekateri avtorji kažejo na nizko kakovost ločevanja z uporabo te metode, medtem ko drugi raziskovalci, nasprotno, med vsemi možnimi metodami raje dodelijo pretvorbo HSC iz popkovnice natančno z uporabo 6% raztopine hidroksietilnega škroba. To poudarja visoko učinkovitost sedimentacije hemopoetskih celic, ki po nekaterih podatkih doseže od 84% do 90%.

Zagovorniki drugega zornega kota, da so skoraj vsi postopki frakcioniranja vključujejo velike izgube yadrosoderzhashih celice in ponudi, da ločevanje s centrifugiranjem, ločevanje krvi kabla v 3 frakcije: eritrocitov, levkocitov in plazma obročnih. Ločevanjem celic na ta način, so izumitelji ugotovili, da na koncu je vsebina mononuklearnih celic zgodnjih hematopoetskih zarodnih celic in celic CD34 + immunophenotype oziroma 90, 88 in 100% prvotne ravni. Podobne količine očiščene rasti v tej metodi popkovnične krvi celice, pridobljene z drugimi raziskovalci: po gručasta sedimentacija dodeljenih 92%, 98% - mononuklearnih, 96% - CD34 pozitivnih celic in 106% enot, ki tvorijo kolonije.

V poznih 90. Letih kot sredstvo za sedimenta pogosto uporablja želatino. V klinični praksi, z uporabo matičnih celic želatina hemopoetičnih izolirane iz popkovnične krvi leta 1994. Pri uporabi 3% raztopino celic z jedri želatina rekuperaciji doseže 88-94%. Razširjena uporaba želatine pri ustvarjanju popkovnične krvi banke je potrdil njegove prednosti pred drugimi sredstvi sedimenta. Primerjalna analiza vseh zgornjih metod izolacije celic z jedri v smislu njihove zaporedno uporabo pri vsakem od vzorcev krvi Test popkovnične je pokazala, da je optimalna sedimenter izhod mononuklearnih celic s fenotipom CD34 + / CD45 +, kot tudi po številu CFU-GM in CFU-GEMM 3% raztopina želatina. Izkazalo se je precej manj učinkovite metode uporabljajo Ficollu gradienta gostote in uporaba metil celuloze in hidroksietil škrob, v kateri hematopoetski izguba celica ne doseže 60%.

Razširitev prostornine presaditve matičnih celic krvi popkovnične krvi je povezana ne le z razvojem metod za njihovo proizvodnjo, temveč tudi s shranjevanjem. Obstaja veliko težav, ki so neposredno povezane s pripravo popkovnične krvi za dolgotrajno shranjevanje in izbiro optimalne tehnologije kriogenovanja za svoje vzorce. Med njimi so vprašanja primernosti izvajanja postopkov ločevanja, uporabe različnih krioprezervacijskih medijev in uporabe metod za pripravo odmrznjenih celic za presaditev. Prevoz avtohtonih vzorcev popkovnične krvi se pogosto izvaja iz regij, oddaljenih od hematoloških centrov. V zvezi s tem se pojavlja problem dovoljenih obdobij za skladiščenje popkovnične krvi od trenutka prejema do začetka krioprezervacije, kar je še posebej pomembno pri razvoju bank za popkovnično krvjo.

Študija funkcionalne dejavnosti hematopoetičnih popkovnične krvi celic po dolgoročno skladiščenje (do 12 let) v tekočem dušiku pokazala, da približno 95% hematopoetičnih celic v tem času ne izgubijo svoje visoke povečanje možnosti. Papir Yurasova S. Et al (1997) so pokazali, da popkovnične krvi na sobni temperaturi (22 ° C) ali pri 4 ° C za 24 do 48 ur, ne bistveno zmanjša viabilnost hematopoetskih celic, da se začetna stopnja prikladno 92 in 88%. Če pa je čas shranjevanja podaljšan na tri dni, se število živih nukleotidnih celic v krvi popkov bistveno zmanjša. Istočasno pa je bilo med drugimi študijami ugotovljeno, da pri shranjevanju 2-3 dni pri temperaturi 22 ° C ali 4 ° C vpliva predvsem viabilnost zrelih granulocitov, ne pa hematopoetskih celic.

Na preživetje popkovnične krvi imajo lahko hematopoetske matične celice negativen vpliv sistemskih komponent za svojo zbirko. Analiza učinka različnih antikoagulantov, ki je dejanje mehanizem zaradi vezave kalcijevih ionov (ACD, EDTA, XAPD-1) za hematopoetskih zarodnih celic v pogojih popkovnične krvi shranjevanja 24 do 72 ur, je pokazala njihov negativen vpliv na sposobnost preživetja celic z jedri. V zvezi s tem so avtorji priporočajo uporabo PBS (fosfatni pufer raztopina) z dodatkom nativne heparina brez konzervansa v koncentraciji 20 U / ml, ki po njihovem mnenju omogoča povečati trajanje skladiščenja nefrakcioniranim popkovnične krvi do 72 ur in shrani funkcionalno delovanje enot, ki tvorijo kolonije. Vendar pa je v študiji ohranjenosti CFU-GM in CFU-G pokazale, da popkovna čas shranjevanja popkovnične krvi pred kriogensko ne sme presegati devet ur. Očitno je, da v tem primeru bi moral delovati načelo, da če je morala nasprotujoče si podatke uporabiti življenje minimalno priporočljivo za shranjevanje popkovnične krvi in začeti programirati zamrznitve izolirane celice v najkrajšem možnem času.

Pri zamrznitvi hematopoetskih matičnih celic popkovnične krvi se 10-odstotna raztopina DMSO navadno uporablja kot krioprotektant. Vendar pa ima poleg izraženega krioprotektivnega učinka dimetilsulfoksid v tej koncentraciji neposreden citotoksični učinek tudi pod pogojem minimalne izpostavljenosti krvotvornim celicam popkovnične krvi. Da bi zmanjšali citotoksični učinek DMSO, se uporablja ničla temperatura izpostavljenosti, se poveča hitrost vseh manipulacij in ponavljajoče pranje po odmrzovanju vzorcev popkovnične vrvi.

Inštitut za hematologijo in transfuziologijo Akademije medicinskih znanosti Ukrajine razvija znanstveno smer od leta 1995, katerega cilj je preučevanje popkovne krvi kot alternativnega izvora matičnih hemopoetskih celic. Zlasti so bile razvite nove tehnologije za kriogeno ohranjanje hemopoetskih celic nefrakcionirane in frakcionirane popkovne krvi pri nizki temperaturi. Kot krioprotektant uporabljamo medicinski polivinilpirolidon z nizko molekularno težo. Metoda krioprezervacije nefrakcionirane popkovnične krvi temelji na izvirni tehnologiji predpriprave celic za zamrzovanje in tehnike posebnega zdravljenja celične suspenzije tik pred presaditvijo.

Eden od najpomembnejših dejavnikov, ki vplivajo na raven funkcionalne aktivnosti krioprezerviranih hemopoetskih matičnih celic, je hitrost hlajenja celične suspenzije, zlasti v fazi kristalizacije. Programski pristop k reševanju problema hitrosti in časa zamrzovanja zagotavlja odlične možnosti za ustvarjanje preprostih in zelo učinkovitih metod krioprezervacije, ne da bi se pred presaditvijo spirali celično suspenzijo iz krioprotektantov.

Faze takojšnjega zamrzovanja in odmrzovanja so najbolj nevarne za preživetje celic med njihovo pripravo. Pri zamrznitvi hemopoetskih celic lahko znaten del njih uničimo v trenutku prehoda medceličnega medija iz tekočine v trdno fazo - kristalizacijo. Da bi zmanjšali odstotek celične smrti, se uporabljajo krioprotektanti, katerih mehanizmi delovanja in krioprotektivna učinkovitost so bili ustrezno zajeti v znanstveni literaturi.

Obetavno smer Optimizacija Tehnike kriogensko kostnega mozga in popkovnične krvi celic združiti v isti raztopini, da bi nizke koncentracije za zaščito pri zamrzovanju z različnimi mehanizmi delovanja, na primer, deluje na intracelularno raven DMSO in hidroksietil škrob ali albumina, ki ima zunajcelično obdajajočega učinek.

Kajti cryoperservation krvnih celic popkovnične tradicionalno uporabljajo 20% raztopino DMSO, ki je trajno mehansko mešamo v ledeni kopeli, smo počasi zlijemo v celični suspenziji doseči enake (1: 1) je volumsko razmerje celične suspenzije in zamrzovanju. Končna koncentracija dimetil sulfoksida je 10%. Celična suspenzija se nato ohladi na programskem kriostatu s hitrostjo HS / min do -40 ° C, po kateri se hitrost hlajenja zviša na 10 ° C / min. Po dosegi -100 ° C se posoda s celično suspenzijo dovaja v tekoči dušik (-196 ° C). S to metodo krioprezervacije je varnost funkcionalno aktivnih mononuklearnih celic po odmrzovanju dosegla 85% začetne ravni.

Spremembe metod krioprezervacije so usmerjene v zmanjšanje koncentracije DMSO z dodajanjem hidroksietilnega škroba (končna koncentracija dimetil sulfoksida in hidroksietilnega škroba je 5% oziroma 6%). Visoka učinkovitost te kombinacije krioprotektantov opazimo, ko je suspenzija mieloidnih celic zamrznjena, z manj kot citoprotekcijo kot z eno samo 10% raztopino dimetilsulfoksida. Število živih nukleotidnih celic je doseglo 96,7% izhodiščne ravni, njihova funkcionalna aktivnost, ocenjena s številom CFU-GM, je bila 81,8%.

Pri uporabi dimetil raztopine sulfoksida pri koncentracijah, ki segajo od 5 do 10% v kombinaciji s 4% hidroksietil škrob (končna koncentracija) je pokazala, da je ohranitev CD34 pozitivnih celic v teh obsegov dimetilsulfoksid praktično nespremenjena. Hkrati je v pogojih zmanjšanje koncentracije DMSO od 5 do 2,5% opazimo množično smrt krvnih celic popkovnične - števila življenja sposobnih celic enot se zmanjša od 85,4 do 12,2%. Drugi avtorji tudi ugotovila, da je 5 do 10% raztopino dimetilsulfoksida (v izvedbenem avtorsko - v kombinaciji z avtologno seruma) z maksimalno učinkovitostjo zagotavlja citoprotekcije med kriogensko ohranjanje popkovnične krvi HSC. Poleg tega zaporedno visoka varnost zamrzne in odmrzne celica je označena v primeru kombinacije 5 ali 10% DMSO 4% raztopine hidroksietil škrob, zlasti z nadzorovano hitrostjo hlajenja TOS / min. V drugi papirja kriogensko zaščitno raztopino, sestavljeno iz treh sestavin že - DMSO, prečiščen humani albumin in RPMI mediju v razmerju 1: 4: 5, ki je bil dodan k celični suspenziji do ene razmerjih enakim volumnom (končna koncentracija DMSO je bila 5%). Po odtaljevanju v vodni kopeli pri temperaturi + 4 ° C je varnost CFU-GM presegla 94%.

Nekateri avtorji predlagajo uporabo nefrakcionirane pankreže za krioprezervacijo, saj se med odstranjevanjem rdečih krvnih celic izgubijo velike količine hematopoetskih celic. V tej izvedbi se 10% raztopina dimetilsulfoksida uporablja za zaščito mononuklearnih celic pred škodljivim učinkom kriokristalizacije. Zamrzovanje se izvaja s konstantno hitrostjo hlajenja HS / min do -80 ° C, po kateri se suspenzija celic krvi popkovnične krvi potopi v tekoči dušik. S to metodo zamrzovanja pride do delne lize eritrocitov, zato vzorci krvi ne zahtevajo frakcioniranja. Po odtaljevanju se celična suspenzija izpere iz prostega hemoglobina in dimetilsulfoksida v raztopini humanega albumina ali v avtolognem serumu bolnika in se uporablja za presaditev.

Ohranjanje hematopoetskih matičnih celic po odtajanju nefrakcioniranega popkovnične krvi je dejansko višja od frakcionirani, vendar v povezavi z krioustoychivostyu od rdečih krvnih celic lahko povzročijo resne težave, ki so posledica po transfuzijo transfuzijo ABO-nezdružljiv rdečih krvničk. Poleg tega se znatno poveča količina shranjene nefrakcionirane krvi. S kliničnega vidika, še bolj prednostno globoko zamrzovanje predhodno izolirali in očistili iz drugih celičnih frakcij hematopoetičnih celic popkovnične krvi.

Zlasti je metoda cryoperservation of popkovnične krvi celic frakcioniranega izkoristil odstrani eritrocite v pripravi za zamrzovanje, ki uporablja 6% raztopine hidroksietil škroba v raztopini sestavek plazmozameshchath "Stabizol". Po odtaljevanju je tako pridobljena celična suspenzija pripravljena za klinično uporabo brez dodatne manipulacije.

Tako je trenutno veliko učinkovitih načinov kriopreserviranja popkovnične krvi. Glavna razlika je v tem, da so vzorci krvi zamrznjeni, neprilagojeni ali se v fazi priprave ločijo v celične frakcije in pobrane nukleirane celice brez primesi eritrocitov.

Transplantacija hemopoetskih izvornih celic popkovnične krvi

V poznih 80-ih - zgodnjih 90-ih v zadnjem stoletju je bilo ugotovljeno, da je krv popkovine, ki oskrbuje plod med nosečnostjo, značilna visoka vsebnost hematopoetskih matičnih celic. Sorazmerna preprostost pridobivanja celic popkovnične krvi in odsotnost očitnih etičnih problemov sta spodbudila uporabo izvornih celic iz popkovnične krvi v praktični medicini. Prva uspešna presaditev popkovnične krvi otroku z anemijo Fanconi je služila kot izhodišče za povečanje količine transplantacije izvornih celic iz matične celice in vzpostavitev sistema za njeno bančno oskrbo. V globalnem sistemu bank za popkovnično krvjo je največji New York Center za plazemsko kri, ki je v bilanci stanja Nacionalnega zavoda za zdravje. Število shranjenih vzorcev krvi v tej banki se približuje 20 LLC. Prav tako se povečuje število prejemnikov (večinoma otrok) in uspešna transplantacija. Po podatkih ameriškega ministrstva za zdravje je obdobje brez presaditve obdobja po presaditvi prejemnikov krvnih ploščic HSC že preseglo 10 let.

To ni presenetljivo, saj so številne študije krvotvornih potenciala popkovnične krvi so pokazale, da količina in kakovost prvih matičnih celic ne samo, da ni slabša od odraslega človeškega kostnega mozga, ampak tudi nekateri ukrepi presegli. Višja proliferativni potencial matičnih celic popkovnične krvi povzročil razvojne značilnosti celične signalizacije, prisotnost receptorjev na HSCs do specifičnih rastnih faktorjev, zmogljivost popkovnične krvi celic avtokrin proizvodnjo rastnih faktorjev, velikost in dolžino telomeres.

Tako genomske in fenotipske značilnosti hematopoetskih matičnih celic iz popkovnične krvi vnaprej kakovosti vsaditev visoko morebitnega okrevanja darovalca krvotvornih pri prejemniku.

Prednosti hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi

Med dejanske koristi uporabe krvotvorni kabel matične celice za presaditev v primerjavi z drugimi viri hematopoetske celice je treba opozoriti, da skoraj nič tveganje za zdravje darovalca (če se ne šteje kot tak placente), medtem ko odpravlja potrebo po splošni anesteziji. Uporaba transplantaciji popkovnične krvi celic širi deloma z HLA-kompatibilen sistem presadka (inkompatibilnosti enim do tremi antigenov). Tehnika dolgotrajno skladiščenje hematopoetičnih popkovnične krvi celic v zmrznjenem stanju, ki poveča verjetnost pridobitve redko HLA-type in zmanjšuje iskanje časovno HLA ujemanjem alogenski transplantaciji. Hkrati se znatno zmanjša tveganje za razvoj nekaterih latentnih okužb, ki jih prenaša prenosna pot. Poleg tega obstaja cenovno ugodna oblika biološkega življenjskega zavarovanja v povezavi z možnostjo uporabe celic popkovnične krvi za avtologno presaditev.

Vendar pa zaradi majhne količine krvi, ki se lahko zbirajo iz posteljice (v povprečju ne več kot 100 ml), da v ospredje problem pridobitev največjega možnega zneska krvi iz popkovine veno povsem v skladu s pogoji minimalno tveganje bakterijske okužbe centralnih pridobljenih vzorcih popkovnične krvi.

Primitivni hematopoetske celice iz popkovnične krvi so običajno označene s prisotnostjo na svoji površini glikofosfoproteina CD34, in na podlagi njihovih funkcionalnih lastnosti s pregledovanjem klonogeno Preskusno ali kolonije formaciji in vitro. Primerjalna analiza je pokazala, da so v popkovnične krvi in kostnega mozga največjo vsebnostjo CD34 pozitivnih mononuklearnih celic v frakciji oziroma 1,6 in 5,0%, najvišja stopnja enot, ki tvorijo kolonije v podskupini CD34 + celic - 80 in 25%, celotne učinkovitosti kloniranje CD34 + -celic - 88 in 58%, največja kolonija tvori celice z visoko proliferativno potencialne (HE-CFC v -populyatsii CD34 +) - 50 in 6,5%. Dodati je treba, da je učinkovitost kloniranja CD34 + CD38 celic in sposobnost, da se odzovejo na stimulacijo citokinske tudi višje v hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi.

Kombinirani fenotipske antigeni Thy-1, CD34 in CD45RA potrjuje visoko proliferativne sposobnosti popkovnične krvi hematopoetskih celic ter izražanje treh antigenov na površini krvnih celic popkovnične kaže, da pripadajo matične celice. Poleg tega je bilo ugotovljeno, da popkovnična kri vsebuje celice s fenotipom CD34 +, ki nimajo linearnih razlikovalnih markerjev. Raven v popkovnični krvi subpopulacij celice s fenotipskim profilom CD34 + / Lin je približno 1% celotnega števila CD34-pozitivnih celic. Hemopoetičnih predhodnih celic povzročajo krvi popkovnične kot limfoidnih celičnih linijah, in številne linearne pluripotentne diferenciacije mieloične celic, kar kaže tudi, da spadajo v matičnih celic.

Kot smo že omenili, so bistvene razlike med kostnem mozgu in popkovnične krvi v množini, pridobljen z enim postopkom vzorčenja za presaditev hematopoetičnih celic. Ko so kostni mozeg izguba presaditvijo celic mase v postopku ločevanja, kriogensko, odtajanju in testiranje dovoljeno v območju od 40-50%, kabel krvne celice kot izguba je zelo pomembna, saj pri uporabi zadostnega števila presaditev HSC lahko vzdrži. Po G. Kogler et al (1998), za presaditev celic v telesu prejemnika maso 10 kg potencial presadkom (skupno število zbranih vzorcev popkovnične krvi - 2098), je lahko vseh vzorcih popkovnične krvi, telesno težo 35 kg - 67%, in le 25% vzorcev, da zagotavljajo učinkovito presaditev pri bolnikih s telesno težo 50-70 kg. Ta klinično stanje kaže, da je treba optimizirati in izboljšati učinkovitost obstoječih metod vzorčenja, razmnoževanje in shranjevanje popkovnične krvi celic. Zato, vprašanja standardizacije metod vzorčenja, testiranja, ločitev in kriogensko ohranjanje popkovnične krvi je zdaj na široko razpravljalo v literaturi za ustvarjanje krvnih bank, njegove uporabe v kliniki, pa tudi o določitvi pogojev in pogojev skladiščenja hematopoetičnih matičnih celic iz popkovnične krvi.

[11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]

Uporaba hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi v medicini

Običajno je mogoče do 10 ⁶ hematopoetskih izvornih celic izolirati iz popkovnične krvi , redko več. Zato je do danes ostaja odprto vprašanje o ustreznosti višine popkovnične krvi krvotvornih matičnih celic za ponovno vzpostavitev hematopoeze odrasle prejemnika. Mnenja o tem vprašanju so bila razdeljena. Nekateri raziskovalci menijo, da je ta količina zadostna za presajanje otroke, vendar premajhna presaditi odraslega človeka, za katerega je dajanje optimalna (7-10) x 10 ⁶ CD34 pozitivnih celic na 1 kg telesne teže - povprečno 7 x 10 ⁸ na presaditev. Iz teh izračunov sledi, da vzorec enega popkovničnega vrha vsebuje 700 krat manj hematopoetskih matičnih celic, kot je potrebno za eno presaditev odraslim bolnikom. Vendar pa se takšna kvantitativna ocena opravi po analogiji s številom transfuziranih celic v kostnem mozgu in popolnoma ne upošteva ontogenetskih značilnosti hematopoeze.

Zlasti upošteva dejstva višji povečanje možnosti hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi v primerjavi s hematopoetskih zarodnih celic kostnega mozga. Ugotovitve in vitro potenciala tvorijo kolonije kažejo, da lahko en sam odmerek zagotavlja popkovnične krvi hematopoetske obnavljanje odraslih prejemnika. Po drugi strani pa ne smemo pozabiti, da se je število HSCs zmanjšuje tudi v procesu razvoja zarodka: vsebnost CD34 pozitivnih celic v popkovnične krvi se linearno zmanjšuje 5-krat v obdobju 20 tednov (kri za študijo je bilo pridobljeno v primeru predčasnega prenehanja nosečnosti) do 40 tednov nosečnosti (obdobje fizioloških rojstev), ki ga spremlja vzporedno, trajno povečanje izražanja linearnih citodiferenčnih markerjev.

Zaradi pomanjkanja standardiziranega pristopa k količinsko v vzorcih popkovnične krvi matičnih celic spor o optimalni odmerek hematopoetičnih matičnih celic iz popkovine v krvi se nadaljuje. Nekateri raziskovalci menijo, da je, kot se merila za izbor vzorcev popkovnične krvi lahko uporabi število celic z jedri in mononuklearnih celic, preračunati na telesno težo prejemnika, da je njihov odmerek. Nekateri avtorji menijo, da je najmanjši količinski prag CD34 + celic, tudi za avtologno transplantacijo HSC, 2 x 10 ⁶ / kg. Povečanje odmerka hematopoetičnih celic 5 x 10 ⁶ celic / kg (skupno 2,5) že zagotavlja bolj primeren za zgodnjem obdobju po presaditvi, zmanjša pogostnost infekcijskih zapletov in skrajša čas zdravljenja z antibiotiki preventivnih o.

Po E. Gluckman et al (1998) v hematologiji za uspešno presaditev krvnih celic popkovnične je uvedba vsaj 3,7 x 10 ⁷ celic z jedri na 1 kg telesne teže prejemnika. Z zmanjšanjem odmerka hematopoetskih izvornih celic 1 x 10 ⁷ ali manj jedrom celic na 1 kg telesne mase pacienta in tveganjem okvar presadka ponavljajoče rak krvi močno poveča. Treba je priznati, da je najmanjše število matičnih celic, potrebna za hitro okrevanje hematopoeze po alopresaditev GSK, še ni znan. Teoretično je to mogoče doseči s pomočjo ene same celice, vendar pri presajanju kostnega mozga klinični kostnega hitro in stabilno vsaditev zagotovljene transfuzije najmanj (1-3) x 10 ⁸ celic z jedri na 1 kg pacientove telesne teže.

Nedavna podrobno študijo za določitev optimalnega števila GSK v onkologijo in hematologijo, vključenih spremljanje bolnikov na tri skupine, izbrane glede na vsebino CD34 pozitivnih celic v presajenega materiala. Bolniki prve skupine so prejemali (3-5) x 10 ⁶ celic / kg. Odmerek HSC pri bolnikih druge skupine je bil (5-10) x 10 ⁶ celic / kg, bolniki tretje skupine pa so prejeli presaditev več kot 10 x 10 ⁶ CD34 + celic / kg. Najboljši rezultati so opazili v skupini prejemnikov, ki so prejeli presaditev s številom CD34-pozitivnih celic, ki so enake (3-5) x 10 ⁶ / kg. S povečanjem odmerka presajenih celic nad 5 × 10 ⁶ / kg niso ugotovili statistično značilnih koristi. Tako zelo veliko količino HSCs v presadka (> 10 x x 10 ⁶ / kg) je bila povezana z veliko količino preostalega reinfuzijo tumorskih celicah, kar vodi do ponovitve bolezni. Ni bilo neposredne povezave med številom transplantiranih alogenskih progenitornih celic in razvojem reakcije "presadka proti gostitelju".

Skupna svetovna izkušnja presaditve krvne slike HSC iz popkov potrjuje njihov velik potencial ponovnega naseljevanja. Hitrost presaditve transplantacije popkovnične krvi je povezana s številom vnesenih nukleotidnih celic. Najboljši rezultati so opazili pri presaditvi 3 × 10 ⁷ / kg, medtem ko je pri kostnem mozgu ta odmerek 2 × 10 ⁸ / kg. Po podatkih centrov za usklajevanje je bilo konec leta 2000 na svetu izdelanih 1200 presaditev celic popkovnične krvi, večinoma iz sorodnikov (83%). Očitno je, da je popkovnična kri mogoče obravnavati kot alternativo kostnem mozgu za presaditev pri bolnikih s hemoblastozami.

Vendar neonatalno narava Cordova vir krvotvornih tkiva spodbujanja zaradi prisotnosti funkcionalnih značilnosti njenega GCW. Vendar pa lahko le klinične izkušnje dajejo odgovor na vprašanje o ustreznosti vzorca popkovnične krvi za odrasle krvotvornih pripravi prejemnika z aplazije za hematopoeze. Presaditev krvnih celic popkovnične se uporablja pri zdravljenju številnih bolezni tumorja in niso tumorja narave: levkemij in mielodisplastičnih sindromov, ne-Hodgkinovega limfoma, in nevroblastoma, aplastične anemije, prirojene Fanconijevim anemije in diamond Črno ventilator, pomanjkanje oprijema levkocitov, Barr sindrom, Gunther bolezni Harlera sindroma, talasemijo .

Bolj pozornost in ločena raziskava si zaslužita imunološke vidike presaditve krvotvornih celic popkovnične krvi. Prikazano je, da v primeru transplantacije izvornih celic popkovnične krvi od darovalcev z nepopolno-HLA ujemanjem rezultati presadkom so povsem zadovoljivo, da v skladu z avtorji, kar kaže nižjo radioinkorporacijo popkovnične krvi, kot v kostnem mozgu.

Podroben študij celično sestavo popkovnične krvi pokazala značilnosti tako fenotipske spektra efektorskih celic imunskega sistema ter njihovo funkcionalno aktivnost, kar naj preuči popkovnične krvi kot vir HSCs z relativno majhnim tveganjem reakcije "presadka proti gostitelju«. Treba je opozoriti, dodatne funkcije Funkcionalna nezrelosti krvničke imunokompetentni kabel neuravnoteženost proizvodnje citokinov in zmanjšanje občutljivosti na citokinov nova regulacija imunskega odziva. Posledično zaviranje citotoksične limfocitne aktivnosti šteje kot dejavnik, ki prispeva k nastanku imunološke tolerance na presajeno hemopoetsko tkivo. V populaciji limfocitov popkovnične krvi, v nasprotju z periferne krvi in kostnega mozga odraslega darovalcev, prevladujejo neaktivni, nezrele celice in supresorskih celic. To kaže na zmanjšano razpoložljivost T-limfocitov iz popkovnične krvi do imunskega odziva. Pomembna značilnost monocitne populacije celic popkovnične krvi je nizka vsebnost funkcionalno popolnih in aktivnih antigen-predstavitvenih celic.

Po eni strani, nizka stopnja zrelosti efektor celice imunskega sistema v krvi odčitkov popkovnične sega do njegove uporabe v kliniki, saj te funkcije omogočajo zmanjšanje intenzivnosti imunskega konflikta med darovalcem in prejemnikom celic. Toda, po drugi strani pa vemo, da za obstoj korelacije med stopnjo reakcije "bolezni presadka proti gostitelju" in presadka proti tumorjem učinek, tj učinek razvoja "presadka proti levkemiji". V zvezi s to študijo tumorja citotoksičnosti krvnih celic popkovnične bila izvedena. Rezultati kažejo, da so kljub zelo oslabljenim imunskim odzivom popkovnične krvi celic na antigensko stimulacijo, aktivirane na prvem mestu naravne celice ubijalke in killeropodobnymi celice, ki aktivno sodelujejo v mehanizmih izvajanja citotoksičnosti proti tumorjem. Še več, v subpopulacij limfocitov popkovnične krvi je bilo ugotovljeno s fenotipom CD16 + CD56 + in CD16 'TCRa / p +. Predpostavlja se, da se te celice v aktivirano obliko izvedbo reakcije "presadka proti levkemiji".

Na Onkološkem inštitutu v Ljubljani, Akademija za medicinske vede Ukrajine so cryopreserved hematopoetske celice iz popkovnične krvi dajati bolnikom z rakom vztrajno hipoplazija hematopoeze zaradi kemoterapije in obsevanja. Pri teh bolnikih, transplantacija hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi učinkovito obnovljena krvni zatiranje, kot je razvidno iz trajnega povišanja zrelih oblikovanih elementov v periferni krvi, kot tudi povečanje kazalcev ki označuje stanje celični in humoralni imunosti. Stabilnost repopulyatsionnogo učinek po presaditvi hematopoetičnih popkovnične krvi celic omogoča nadaljevanje obsevanja in kemoterapije, ne da bi prekinili zdravljenje. Obstajajo dokazi bolnic z rakom matičnih celic popkovnične krvi večja učinkovitost presadkov: letna nevarnost ponovitve tumorja pri njihovi uporabi je 25% v primerjavi s 40% pri bolnikih z genom presajenega alogensko kostnega mozga.

Mehanizem delovanja krioprezerviranih izvornih celic popkovnične krvi, je treba obravnavati kot rezultat humoralnega stimulacijo hematopoeze prejemnikov edinstveno sposobnost novorojenih celic avtokrin proizvodnjo hematopoetskih rastnih faktorjev, kot tudi zaradi začasnega prijetje presadka dajalca celic (kot potrditev povzroča - znatno povečanje vsebnosti periferne krvi fetalnega hemoglobina prejemnika 7-15 th dan po transfuziji, v primerjavi z izhodiščno vrednostjo). Odsotnost v prejemnikov popkovnične krvi reakcij po transfuziji - posledica njegove relativne tolerance imunskih celic, kot tudi merilo zaupanja uporabnost krioprezervirane biološkega materiala.

Predniške celice T limfocitov Killer popkovnične krvi sposoben aktivacije pod vplivom eksogenega stimulacijo citokinske, ki se uporablja za razvoj novih ex vivo in na metode in vivo induciranje protitumorske citotoksična limfoidne celice za naknadno presaditvi imunoterapijo. Poleg tega je "nezrelost" genoma imunskih celic popkovna krvi omogoča njihovo uporabo za povečanje protitumorske aktivnosti, ki jih molekularnega modeliranja.

Danes je popkovnična kri našla široko uporabo predvsem pri pediatrični hematologiji. Pri otrocih z akutno levkemijo alopresaditev hematopoetičnih izvornih celic popkovnične krvi v primerjavi z alotransplantatov kostnega mozga, znatno zmanjša pogostnost reakcije "presadek proti gostitelju«. Vendar pa je treba opozoriti, v daljšem obdobju nevtropenije in trombocitopenije, in na žalost, višja raven 100-dnevni umrljivosti po transplantaciji. Daljše obdobje okrevanja v periferni krvi granulocitov in trombocitov lahko posledica nezadostnega diferenciacije posameznih podpopulacij CD34 pozitivnih celic popkovnične krvi, kar dokazuje nizka stopnja absorpcije radioaktivnih rodamina in nizko izražanje antigenov CD38 na svoji površini.

Hkrati je presaditev hematopoetskih matičnih celic popkovna krvi odraslih bolnikov, opravljenih zaradi pomanjkanja tako združljiv darovalca nepovezani kostnega mozga, pa tudi možnosti za mobilizacijo avtologni HSC pokazala visoko letno preživetje brez recidiva pri bolnikih, mlajših od 30 let (73%) . Razširitveni starost prejemnik razpon (18-46 let) zmanjšalo preživetje do 53%.

Kvantitativna analiza celic z CD34 + kostnega mozga in popkovnične krvi fenotipom so pokazali višjo (3,5-krat) njihova vsebnost v kostnem mozgu, vendar popkovnične krvi pokazali znatno prevlada celic z fenotipske profilu CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markerjev CD34 + HLA-DR razmnožujejo bolj aktiven kot celice z immunophenotype CD34 + HLA-DR +, kot je bilo potrjeno na poskusnih študijah rasti dolgoročnega kulture hematopoetičnih celicah in vitro. Primitivni prednikov celic s fenotipom CD34 + CD38 iz popkovnične krvi in kostnega mozga, vendar popkovnične krvi celice z označevalcem določenem CD34 + CD38 imajo višjo klonogeno aktivnost kot hematopoetičnih celic istega fenotipa, izoliranih iz odraslega darovalca kostnega mozga. Poleg tega bo popkovnične krvi Celice CD34 + CD38 immunophenotype razmnožujejo kot odziv na stimulacijo s citokini (IL-3, IL-6, G-CSF) in reproducira 7-krat več kolonije v dolgoročne kultur kot celice kostnega mozga.

Banke matičnih celic iz popkovnične krvi

Za pravilen razvoj novega področja praktične medicine - presaditev matičnih celic popkovnične krvi, kakor tudi za opravljanje presaditve hematopoetskih matičnih celic kostnega mozga, morate imeti široko mrežo krvnih bank, ki so že ustanovljene v ZDA in Evropi. Omrežja bank za popkovnično krizo združujejo Združenje Netcord Banks. Izvedljivost vzpostavitve mednarodno združenje krvnih bank popkovnične se določi glede na dejstvo, da za opravljanje nepovezani presaditev potrebujejo veliko število vzorcev popkovnične krvi vnesli, ki omogoča, da izberejo HLA-enaka darovalca. Le vzpostavitev sistema bank s shranjevanjem vzorcev krvi različnih vrst HLA v njih resnično lahko reši problem iskanja potrebnega darovalca. Organizacija takega sistema bank za popkovnične krvave zahteva predhodni razvoj etičnih in pravnih norm, o katerih se trenutno razpravlja na mednarodni ravni.

Če želimo ustvariti banke iz popkovnične krvi v Ukrajini, je treba pripraviti številne določbe in dokumente.

Prvič, to so vprašanja standardizacije metod vzorčenja, frakcioniranja in zamrzovanja krvi popkovnične vrvi. Treba je urediti pravila o Popkov zbiranje popkovnične krvi v bolnišnicah, v skladu z zahtevami iz medicinske etike, določiti minimalno količino popkovnične krvi, ki zagotavlja uspešno presaditev. To je treba primerjati in standardizacija različnih kriterijev ocenjevanja kakovosti in številu hematopoietičnih matičnih celic, kot tudi metode HLA tipizacijo in diagnostičnih metod genetskih in nalezljivih bolezni, ki se lahko prenašajo s infuzijo krvnih celic popkovnične določena splošna merila za izbor zdravih darovalcih. Prav tako je vredno razpravljati o vzpostavitvi ločenih skladiščnih zmogljivosti za serum, celice in DNA iz popkovnične krvi.

Za vzpostavitev razmerja z registrima donatorjev kostnega mozga je nujno organizirati računalniško mrežo podatkov o popkovnični krvi. Za nadaljnji razvoj presaditev celic je treba razviti posebne protokole primerjali rezultate presaditvijo popkovnične krvi in kostnega mozga iz HLA-enakih sorodniki in nesorodnih dajalcev. Pri obravnavanju etičnih in pravnih težav v klinično uporabo popkovnične krvi celic lahko pomagajo standardizirati dokumentacijo, vključno s privoljenjem staršev, kakor tudi obvestilo o materi ali sorodniki otroka, označenega z genetsko in / ali nalezljivih bolezni.

Odločilni pogoj za razvoj presaditev celic v Ukrajini bo sprejetje nacionalnega programa za darovanje matičnih celic in razvoju mednarodnega sodelovanja z drugimi državami prek svetovnega združenja darovalca kostnega mozga (WMDA), program za darovalca kostnega mozga National ZDA (NMDP) in drugih registrov.

Posploševanja še kratko zgodovino krvotvornih presaditev matičnih celic iz popkovnične krvi, smo ugotovili, da je prva predpostavka za možnost klinične uporabe popkovnične krvi, je v zgodnjih 70-ih, je bilo v 80 letih potrdili rezultate eksperimentalnih študij na živalih, in v letu 1988 leto je bila opravljena prva na svetu presaditev hematopoetskih celic človeškega popkovnične krvi, nato pa se je začela razvijati globalno mrežo popkovnične krvi bank. Po 10 letih, je bilo število bolnikov z transplantiranih hematopoetskih celic popkovnične krvi bližje 800. Med njimi bolnikov z različnimi boleznimi tumorskih (levkemija, limfom, solidni tumorji) in ne-tumor (prirojeno imunsko pomanjkljivostjo, slabokrvnost, bolezni, povezanih z presnovne motnje) narave.

Pri popkovnični krvi je vsebnost zgodnjih in predanih celičnih prednikov večja kot v periferni krvi odraslega. Po številu enot granulocitne makrofagne tvorijo kolonije in njihovo proliferativno potenciala popkovnične krvi, je veliko večja kot periferne krvi odraslih, tudi po dajanju rastnih faktorjev. V dolgotrajnih celičnih kulturah in vitro je prišlo do večje proliferativne aktivnosti in preživetja celic krvi popkovnice kot celice kostnega mozga. V kritičnih trenutkih v presaditev izvornih celic popkovnične krvi so hematopoetični potencialno število in jedri celice, prisotnost okužbe citomegalovirus, HLA-združljivi darovalca in prejemnika, telesne teže in starosti pacienta.

Kljub temu je treba transplantacijo matičnih celic krvi popkovnice obravnavati kot alternativo presaditvi kostnega mozga, da bi zdravili hude krvne bolezni, zlasti pri otrocih. Klinični problemi presaditev krvnih celic popkovnične postopoma rešiti - obstajajo že zelo učinkovite tehnike vzorčenja, ločevanje in shranjevanje z zamrzovanjem iz popkovnične krvi celic, če pogoje za nastanek popkovnične krvi bank, so metode testiranja izboljšati celic z jedri. Optimalno ločitev v obsežnih predoblik popkovnične krvi hemopoetičnih matičnih celic pri vzpostavitvi bank je treba obravnavati kot 3% raztopino želatine in 6% raztopine hidroksietil škrob.

Perehrestenko P. Et al (2001) upravičeno opozarjajo, da je treba presaditev popkovnične krvi matičnih celic bo svoje mesto v zapletenih terapevtskih ukrepov za premagovanje depresijo hematopoeze različnih izvorov, kot GSK popkovnične krvi razlikujejo v številnih pomembnih prednosti, med katerimi pomembno je relativna enostavnost spravila, ni nevarnosti za darovalca, nizko kontaminacije novorojenih celic z virusi in relativno nizki stroški za presaditev. Nekateri avtorji predlagajo, da se presaditev popkovnične krvi celic manj pogosto kot celice kostnega mozga spremlja zapletov, povezanih z reakcijo »presadka proti gostitelju«, ki naj po njihovem mnenju šibek izraz v popkovnične krvi celic HLA-DR antigenom in njihovimi nezrelost. Kljub temu pa je glavni populaciji jedrom celic popkovnične krvi so T-limfociti (SDZ-pozitivne celice), katerih vsebina je približno 50%, kar je 20% manj kot v periferni krvi odraslega človeka, ki pa razlike fenotipske podpopulacij celic T iz teh viri so zanemarljivi.

Med dejavniki, ki neposredno vplivajo na preživetje matičnih celic presaditvijo popkovnične krvi, moramo omeniti starost bolnikov (najboljše rezultate so opazili pri prejemnikih, starih do 5 let), zgodnje odkrivanje bolezni ter obliko levkemije (učinkovitost je bistveno večja v akutno levkemijo). Od velikega pomena so odmerek nukleiranih celic popkovnične krvi in njihova združljivost s prejemnikom. To ni analiza nesreča klinične učinkovitosti presaditve popkovnične krvi GSK v onkologijo in hematologijo kaže najboljše rezultate zdravljenja z uporabo s tem povezanih presaditev: enoletno preživetje brez bolezni v tem primeru doseže 63%, medtem ko je nepovezani presaditev - le 29%.

Tako je prisotnost velikega števila matičnih celic popkovnične krvi in visoke repopulyatsionnaya sposobnost novorojenih hematopoetskih izvornih celic, da je primeren za alogensko presaditev pri bolnikih z hematoloških malignosti. Vendar pa ugotavljajo, da kratek pregled hematopoeze po transplantaciji hematopoetskih izvornih celic popkovnične krvi "se raztegne v času": obnavljanje vsebine v periferni krvi nevtrofilcev običajno pojavi proti koncu 6. Teden in trombocitopenija pojav izgine, običajno po 6 mesecih. Poleg tega nezrele krvnih tvorbo celic popkovnične krvi ne izključuje imunološkega konflikta: težak potek akutne in kronične reakcijske "presadka proti gostitelju« opazili vsakokrat v 23 in 25% prejemnikov. Recidive akutne levkemije do konca prvega leta po transplantaciji popkovnične krvi celic najdemo v 26% primerov.

[18], [19], [20], [21]