Vsa vsebina iLive je pregledana ali preverjena, da se zagotovi čim večja dejanska natančnost.
Imamo stroge smernice za pridobivanje virov in samo povezave do uglednih medijskih strani, akademskih raziskovalnih institucij in, kadar je to mogoče, medicinsko pregledanih študij. Upoštevajte, da so številke v oklepajih ([1], [2] itd.) Povezave, ki jih je mogoče klikniti na te študije.
Če menite, da je katera koli naša vsebina netočna, zastarela ali drugače vprašljiva, jo izberite in pritisnite Ctrl + Enter.
Verižna reakcija s polimerazo (PCR) v diagnostiki nalezljivih bolezni
Medicinski strokovnjak članka
Zadnji pregled: 05.07.2025
PCR je ena od diagnostičnih metod DNK, ki omogoča milijonkratno povečanje števila kopij zaznanega odseka genoma (DNK) bakterij ali virusov z uporabo encima DNK polimeraze. Testirani odsek nukleinske kisline, specifičen za dani genom, se večkrat pomnoži (pomnoži), kar omogoča njegovo identifikacijo. Najprej se molekula DNK bakterij ali virusov s segrevanjem razdeli na dve verigi, nato se v prisotnosti sintetiziranih začetnih oligonukleotidov DNK (nukleotidno zaporedje je specifično za genom, ki ga določamo) vežejo na komplementarne odseke DNK, druga veriga nukleinske kisline pa se po vsakem začetnem oligonukleotidu v prisotnosti termostabilne DNK polimeraze sintetizira. Pridobiva se dve molekuli DNK. Postopek se večkrat ponovi. Za diagnostiko zadostuje ena molekula DNK, torej en bakterijski ali virusni delec. Uvedba dodatne faze v reakcijo - sinteze DNK na molekuli RNA z uporabo encima reverzne transkriptaze - je omogočila testiranje RNA virusov, kot je virus HCV. PCR je tristopenjski postopek, ki se ciklično ponavlja: denaturacija, vezava začetnih oligonukleotidov, sinteza (polimerizacija) DNK. Sintetizirano količino DNK določimo z ELISA ali elektroforezo.
PCR lahko uporablja različne biološke materiale - krvni serum ali plazmo, strganje sečnice, biopsijo, plevralno tekočino, cerebrospinalno tekočino itd. PCR se uporablja predvsem za diagnosticiranje nalezljivih bolezni, kot so virusni hepatitis B, virusni hepatitis C, virusni hepatitis D, okužba s CMV, spolno prenosljive okužbe (gonoreja, klamidija, mikoplazma, okužbe z ureaplazmo), tuberkuloza, okužba z HIV itd.
Prednost PCR pri diagnosticiranju nalezljivih bolezni pred drugimi raziskovalnimi metodami je naslednja:
- povzročitelja okužbe je mogoče zaznati v katerem koli biološkem okolju telesa, vključno z materialom, pridobljenim med biopsijo;
- možno je diagnosticirati nalezljive bolezni v najzgodnejših fazah bolezni;
- možno je kvantitativno ovrednotiti rezultate raziskave (koliko virusov ali bakterij je v preučevanem materialu);
- visoka občutljivost metode; na primer, občutljivost PCR za odkrivanje DNK virusa hepatitisa B v krvi je 0,001 pg/ml (približno 4 × 10² kopij /ml), medtem ko je občutljivost metode hibridizacije DNK z uporabo razvejanih sond 2,1 pg/ml (približno 7 × 10² kopij /ml).
[